لمحة عن فحص زرع البول

استطبابات اجراء فحص زراعة البول الجرثومي

عند المرضى الذين لا يعانون من أعراض:

ظهور الكريات البيض في البول، البيلة الدموية أو اختبار النتريت الإيجابي في المرضى الذين يعانون من عوامل الخطر (كبت المناعة ، الارتجاع المثاني الحالبي ، اضطرابات افراغ المثانة)
الحمل (العرض الأول و 16 أسبوعا من الحمل)
قبل وبعد الإجراءات التداخلية في المسالك البولية
بعد العلاج بالمضادات الحيوية عند النساء الحوامل أو الرجال أو التهاب الحويضة والكلية أو التهابات المسالك البولية المعقدة

عند المرضى الذين يعانون من أعراض:

جميع المرضى الذين يعانون من التهاب المسالك البولية المشتبه به سريريا ، باستثناء النساء المصابات بالتهاب المثانة غير المصحوب بمضاعفات
للشكاوى غير الواضحة في البطن أو ألم الخاصرة
لعلاج التهابات المسالك البولية المتكررة
إذا كانت هناك علامات لعدوى المسالك البولية في المستشفيات
عدم نجاح العلاج ، الحمى أو انتان الدم sepsis

جمع عينة البول:

الوسيلة الأولى لجمع البول هي جمع البول بطريقة عقيمة كجزء من القسطرة البولية أو أثناء التدخلات. وبخلاف ذلك ، يتم الحصول على البول من الرجال عن طريق اخذ عينة بول في منتصف عملية التبول، ومن النساء عن طريق القسطرة البولية أحادية الاستخدام ومن الرضع عن طريق الأكياس اللاصقة أو ثقب المثانة فوق العانة. يكون البول في منتصف عملية التبول عند النساء ذا مغزى سريريا فقط إذا لم يكن مرضيا.

4 أكواب عينة البول:

في حال الشك بالتهاب البروستات المزمن ، يتم جمع 4 أجزاء من التبول بشكل منفصل وفحصها ميكروبيولوجيًا (الفحص المجهري للرواسب وزرع البول)

أول 10 مل من البول (جراثيم مجرى البول)
البول في منتصف عملية التبول (جراثيم المثانة البولية)
البروستاتا (جراثيم البروستاتا): عادة أقل من 10 كريات بيضاء لكل مجال رؤية عند التكبير العالي.
أول 10 مل من البول بعد تدليك البروستاتا (جراثيم البروستاتا)

ونظرا للجهد الكبير والتكلفة ، فقد ساد اجراء الفحص على إحدى العينتين:

عينة البول في منتصف التبول (جراثيم المثانة البولية)
أول 10 مل من البول بعد تدليك البروستاتا (جراثيم البروستاتا)

نقل عينة زرع البول و حفظها:

من الأفضل معالجة البول الأصلي في غضون ساعتين ؛ ولأوقات النقل الأطول ، يجب تبريد البول أو تخزينه في عبوات خاصة (تحوي حمض البوريك المثبت).

عدد مستعمرات الجراثيم شبه الكمي

أولاً ، يتم مسح 10 ميكرولتر من البول عموديا في منتصف النصف العلوي لطبق بتري الذي يحوي وسط الزرع بحلقة أوز معايرة ، ثم يتم إجراء مسحة تخفيف بنفس الاوز يمين و يسار من أعلى إلى أسفل كما هو موضح في الصورة المرفقة.

يتم حضن الأطباق لمدة 24 ساعة عند 36 درجة مئوية ويتم عمل العدد التقريبي للمستعمرات النامية على وسط الزرع كما يلي:

نمو مستعمرة واحدة تتوافق مع 100 CFU / مل
نمو 10 مستعمرات 1000 CFU / مل
نمو 100 مستعمرة 10000 CFU / مل
ونمو 1000 مستعمرة 100000 CFU / مل.

يتم تحديد عدد الجراثيم بشكل دلالي بالمقارنة مع الصور المعيارية. إن تحديد عدد الجراثيم بمساعدة أوساط الزرع الجرثومي المنمية الجاهزة (زرع البول عن طريق غمر البول مثل Urikult) منخفضة الدقة ويجب أن تظل استثناء.

أجار CLED:

غالبا ما يستخدم الأجار غير الانتقائي في زراعة البول الكمية ، فهو يمكّن من نمو جميع البكتيريا النموذجية لعدوى المسالك البولية. يرمز CLED إلى آجار السيستين اللاكتوز ناقص الشوراد ، حيث يمنع محتوى الإلكتروليت (الشوراد) المنخفض جرثومة المتقلبة proteus من الانتشار على سطح وسط الزرع. تشكل البكتيريا التي تخمر اللاكتوز مستعمرات صفراء وتلون الأجار الأصفر ، بينما تشكل البكتيريا غير المخمرة للاكتوز مستعمرات زرقاء رمادية ويظل لون الأجار مائل إلى الزرقة.

100000 بكتيريا لكل مل من البول الذي تم جمعه بشكل نظيف هو علامة على وجود عدوى مهمة سريريًا في المسالك البولية. في حالة زيادة إفراز البول أو جمع البول المعقم ، يمكن أن تكون البيلة الجرثومية ذات الأعداد البكتيرية المنخفضة أيضا مؤشرا مهما لعدوى المسالك البولية.

التعرف على البكتيريا

من المنطقي تحديد البكتيريا فقط إذا لم يكن هناك نمو بكتيري مختلط (نمو أكثر من جرثومين). يشير النمو البكتيري المختلط إلى وجود تلوث أثناء جمع البول وفي هذه الحالة لا يتم تحديد انواع هذه الجراثيم ويجب اعادة الزرع بعد جمع عينة بول بطريقة نظيفة و مناسبة.

لا يمكن التعرف على البكتيريا بشكل صحيح إلا إذا كانت مستعمراتها تنمو وحيدة و منفصلة عن باقي المستعمرات الاخرى في حال نمو جرثومين مثلا.

في المستعمرات المتكدسة ، يمكن أن تنمو جراثيم مختلفة مختلطة دون أن يلاحظها أحد. في حالات الشك أجراء نقل لها على وسط آخر باستخدام تقنية 3 أوز لفصلها عن بعضها كما هو موضح في الصورة التالية.

3-أوز مسحة عيينة لعزل المستعمرات البكتيرية. في الخطوة الأولى (1) يتم مسح و نشر المستعمرة المأخوذة بحلقة أوز معقمة على وسط الزرع ، بين الخطوتين الإضافيتين (2 و 3) يتم تغيير الحلقة أو تعقيمها فوق اللهب.

طريقة عمل مسحة 3-أوز لعينة مأخوذة من المستعمرات البكتيرية المختلطة. في الخطوة الأولى (1) يتم مسح و نشر المستعمرة المأخوذة بحلقة أوز معقمة على وسط الزرع ، بين الخطوتين الإضافيتين (2 و 3) يتم تغيير الحلقة أو تعقيمها فوق اللهب.

في الحالة المثالية لزرع البول، يتم أيضا تلقيح أو زرع الوسائط الانتقائية التالية أثناء زرع البول الكمية:

أجار ماكونكي MacConkey-Agar:

أجار MacConkey هو وسط انتقائي للنمو التفضيلي للبكتيريا سالبة الجرام. يتم تلوين البكتيريا المخمرة لسكر اللاكتوز باللون الأحمر البنفسجي بواسطة مشعر وتشكل المستعمرات الغير المخمرة مستعمرات رمادية.

أجار كولومبيا الدم CNA :

يعد Columbia Blood CNA Agar وسطا انتقائيا للنمو التفضيلي للبكتيريا موجبة الجرام (خاصة المكورات العقدية Strectococci والمكورات المعوية Enterococci والمكورات العنقودية Staphylococci). يحتوي الأجار على كريات الدم الحمراء السليمة والمضادات الحيوية كوليستين (بوليميكسين إي) وحمض الناليديكسيك ، والتي تمنع نمو البكتيريا سالبة الجرام. يمكن تضييق البكتيريا بشكل أكبر وفقًا لسلوك انحلال الدم: انحلال الدم α (تخضير بسبب أكسدة الهيموجلوبين) ، انحلال الدم β (هالة انحلال بسبب تحلل كريات الدم الحمراء) وانحلال الدم γ.

وسط سابورو دكستروز أجار:

Sabouraud Dextrose Agar هو وسط زرع انتقائي تنمو عليه الفطور و الخمائر والعفن بشكل انتقائي.

معرفة نوع البكتيريا النامية بشكل تقريبي:

تظهر المؤشرات الأولى لنوع البكتيريا في مزرعة البول من خلال نمط النمو على أوساط الأجار المذكورة أعلاه وبمساعدة تفاعلات اختبار كيميائية بسيطة:

نمو الجراثيم على وسط أغار MacConkey => عصيات سالبة الجرام . يمكن إجراء مزيد من التمايز بمساعدة تفاعل اللاكتوز وتفاعل أوكسيديز .
النمو على كولومبيا Blood CNA Agar مكورات إيجابية الجرام. يمكن أن يجرى تمايز إضافي بمساعدة تفاعل الكاتلاز ، تفاعل انحلال الدم ، حل الأيسكولين ، اختبار CAMP وحساسية الجرثوم على صاد النوفوبيوسين .
النمو على أجار Sabouraud: عادة مايدل النمو على الخمائر مثل المبيضات.

تحديد المقاومة أو المضاد الحيوي المناسب

يتم تعليق كمية محددة من المستعمرات الفردية من زرع جرثومي نقي في محلول كلوريد الصوديوم. يتم تقدير كمية البكتيريا المعلقة على أساس التعكر (McFarland Standard 0.5) أو ، بشكل أكثر دقة بمساعدة المقياس الضوئي. يتم تلطيخ المعلق البكتيري بالكامل على وسط أجار مولر-هينتون باستخدام ماسحة قطنية معقمة. الهدف هو النمو المتكافئ والمتجمع للمستعمرات البكتيرية. توضع الاقراص التي تحتوي على المضادات الحيوية الشائعة (اختبار انتشار على الأجار) على وسط أجار مولر-هينتون ويتم تحضينها لمدة 24 ساعة عند 36 درجة مئوية. ينتشر المضاد الحيوي من القرص إلى الأجار ، واعتمادا على الحساسية ، يشكل منطقة تثبيط نمو بأحجام مختلفة يتم قياسها بالمسطرة و بحسب الارقام الناتجة وبالاعتماد على قيم مرجعية عالمية مثل EUCAST يتم معرفة درجة حساسية الجرثوم على صاد ما أو مقاومته له.